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温育与洗板方式对ELISA检测结果的影响
发布时间:2018-10-30   点击次数:41次

 

酶联免疫吸附试验(ELISA)因灵敏度高、特异性强、重复性好、操作简单、费用低廉而被广泛应用,例如ELISA检测乙肝表面抗原(HBsAg)敏感度可达0.5ng/mL。但是如果不注意正确的操作规程,将影响结果的准确性。影响ELISA检测结果准确性的因素较多,如试剂因素、温育条件、洗板方式等,因此操作控制不当会造成结果偏差。在各个实验室环境不同的情况下,如果对实验各环节进行标准化,排除潜在的影响因素,可以最大限度地降低检测的系统误差。

 

 

一、不同的温育方式对酶免检测结果的影响

以ELISA法HBsAg为例,有研究表明,应用样本分配仪加入微孔板,然后分别通过37℃干式温箱温育和37℃水浴温育处理后检测样本的吸光度(A)值。结果37℃干式温箱温育和37℃水浴结果没有明显差异。

 

二、洗板次数与浸泡时间对酶免检测结果的影响

以ELISA法HBsAg检测为例。有研究表明,只改变洗板次数的情况下,阴性对照、阳性对照及质控品光密度值(OD值)均值均随洗板次数增加而降低;弱阳性标本阳性率随洗板次数增加而降低。只改变洗板浸泡时间的情况下,阴性对照、阳性对照及质控品OD值均值均随浸泡时间增加而降低;弱阳性标本OD值也随浸泡时间的增加而降低,弱阳性标本阳性率也随浸泡时间增加而降低。结论:洗板是ELISA操作中的关键步骤,人为改变洗板次数和浸泡时间均会影响检测特异度和灵敏度,必须严格按照说明书的要求进行洗板操作。

 

 

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